Для розморожування сперми в необлицьованих гранулах, в пунктах штучного осіменіння необхідно мати стерильні скляні флакони об'ємом 10 мл, 2,9% розчин лимоннокислого натрію, розфасований в ампули по 1 мл, водяну баню або спеціальні відтавачі,5 стерильний анатомічний пінцет довжиною 25-30 см, стерильні марлеві серветки, рушник, тампонницю з тампонами, просоченими 96° спиртом, штатив, мікроскоп з нагрівальним столиком, чисте предметне та покривне скло, захисні окуляри.
Перед підготовкою інструментів до роботи технік одягає білий халат, ковпак або косинку. Миє стіл та руки. Потім готує мікроскоп до роботи: знімає з мікроскопа чохол, по необхідності протирає, підключає освітлювач, регулює освітленість у мікроскопі, предметне та покривне скло кладе на обігрівальний столик мікроскопа. Готує термостатовану водяну баню температурою 38°С, опускає термометр. На чистий стіл ставить тампонницю з тампонами, просоченими спиртом 96°. На край столу кладе рукавички, канцелярські скріпки, піпетки, ампули, серветки та інші необхідні для запліднення інструменти згідно з технологією.
Пінцетом дістає перший спиртовий тампон, обробляє пальці рук від кінчиків пальців до долоні, вільну частину столу та викидає тампон. Другим тампоном обробляє підставку для інструментів, протираючи спочатку середню частину, а потім бічні та нижню її частину. Все в одному напрямі. Ставить підставку на стіл. Тампон викидає. Третім тампоном обробляє скляну паличку, пінцет, корнцанг, ножиці, інструмент для запліднення, ампулу з цитратом (усі зверху вниз), викидає його. Оброблені інструменти кладе на підставку, а цитрата ампулу розкриває різаком, так, щоб в отвір вільно входила гранула. Поміщає їх у водяну лазню чи столик Морозова для підігріву на 2-3 хв. Не можна розкривати ампули, розбиваючи їх по зовнішній стінці, оскільки скло, що потрапило до цитрату, може травмувати слизову оболонку матки.
Потім приступає до розморожування гранул.
Гранули бувають трьох видів:
• необлицьовані 0,1-0,2 мл (з високою концентрацією сперміїв, вимагають розведення дози ізотонічними розчинами перед заплідненням);
• необлицьовані 0,5-1,0 мл (з середньою концентрацією сперміїв, розведення дози не потрібно);
• гранули, фанеровані в полімерну оболонку (об'єм 0,25-0,33 мл).
Перед вилученням гранул технік надягає захисні окуляри, відкриває кришку судини Дьюара, охолоджує зануренням у рідкий азот бранші пінцета, швидко підтягує до верхньої третини горловини судини каністру зі спермою і витягує одну гранулу і швидко переносять у флакон або ампулу лимоннокислого натрію.
Час від вилучення гранули з рідкого азоту до перенесення водяну баню становить трохи більше 5 з, а час відтавання гранули – 8-10 з. Під час розморожування флакон або ампулу обережно похитують, не дістаючи з водяної лазні, до появи тонкого стрижка льоду в гранули. Після розморожування сперми флакон або ампулу зі спермою відразу виймають з водяної лазні, протирають насухо і ставлять у штатив. Температура в приміщенні пункту має бути не нижчою за 18-20°С.
На предметне скло, що лежить на нагрівальному столику мікроскопа, що має температуру 38-40°С, скляною паличкою або піпеткою наносять краплю відтаєної сперми з флакона або ампули, накривають покривним склом і оцінюють. Якість відтаної сперми визначають під мікроскопом за рухливістю сперматозоїдів. При позитивній оцінці її поміщають у інструмент для запліднення. Оттаянную сперму необхідно використовувати протягом 10-15 хв.
Розморожування сперми в необлицьованих гранулах об'ємом 0,5-1,0 мл і фанерованих об'ємом 0,25-0,33 мл здійснюють без розведення цитратом натрію.
Категорично забороняється розморожувати гранули за кімнатної температури або в одному флаконі більше однієї гранули, а також залишати розморожену сперму у водяній бані. Гранули замороженої сперми мають бути правильною округлою формою без пошкоджень.