Для размораживания спермы в необлицованных гранулах, в пунктах ис¬кусственного осеменения необходимо иметь стерильные стеклянные флаконы объемом 10 мл, 2,9 % раствор лимоннокислого натрия, расфасованный в ампулы по 1 мл, водяную баню или специальные оттаиватели, спиртовой термометр до 50°С, стерильный анатомический пинцет длиной 25-30 см, стерильные марлевые салфетки, полотенце, тампонницу с тампонами, пропитанными 96° спиртом, штатив, микроскоп с нагревательным столиком, чистые предметные и покровные стекла, защитные очки.
Перед подготовкой инструментов к работе, техник надевает белый халат, колпак или косынку. Моет стол и руки. Затем подготавливает микроскоп к работе: снимает с микроскопа чехол, по необходимости протирает, подключает осветитель, регулирует освещенность в микроскопе, предметные и покровные стекла кладет на обогревательный столик микроскопа. Готовит термостатированную водяную баню температурой 38°С, опускает в неё термометр. На чистый стол ставит тампонницу с тампонами, пропитанными 96° спиртом. На край стола кладет перчатки, канцелярские скрепки, пипетки, ампулы, салфетки и другие необходимые для осеменения инструменты согласно технологии.
Пинцетом достает первый спиртовой тампон, обрабатывает пальцы рук от кончиков пальцев к ладони, свободную часть стола и выбрасывает тампон. Вторым тампоном обрабатывает подставку для инструментов, протирая сначала среднюю часть, а затем боковые и нижнюю ее часть. Всё в одном направлении. Ставит подставку на стол. Тампон выбрасывает. Третьим тампоном обрабатывает стеклянную палочку, пинцет, корнцанг, ножницы, инструмент для осеменения, ампулу с цитратом (всё по направлению сверху вниз), выбрасывает его. Обработанные инструменты кладет на подставку, а ампулу цитрата вскрывает резаком, так, чтобы в отверстие свободно входила гранула. Помещает её в водяную баню или на столик Морозова для подогрева на 2-3 мин. Нельзя вскрывать ампулы, разбивая их по наружной стенке, так как стекло, попавшее в цитрат, может травмировать слизистую оболочку матки.
Затем приступает к размораживанию гранул.

Гранулы бывают трех видов:
• необлицованные 0,1-0,2 мл (с высокой концентрацией спермиев, требуют разбавление дозы изотоническими растворами перед осеменением);
• необлицованные 0,5-1,0 мл (со средней концентрацией спермиев, разбавления дозы не требуется);
• гранулы, облицованные в полимерную оболочку (объем 0,25-0,33 мл).


Перед извлечением гранул техник надевает защитные очки, открывает крышку сосуда Дьюара, охлаждает погружением в жидкий азот бранши пинцета, быстро подтягивает к верхней трети горловины сосуда канистру со спермой и извлекает одну гранулу и быстро переносят во флакон или ампулу с 1 см3 2,9 % раствора лимоннокислого натрия.
Время от извлечения гранулы из жидкого азота до переноса в водяную баню составляет не более 5 с, а время оттаивания гранулы – 8-10 с. Во время оттаивания флакон или ампулу осторожно покачивают, не доставая из водяной бани, до появления тонкого стерженька льда в грануле. После оттаивания спермы флакон или ампулу со спермой сразу вынимают из водяной бани, протирают насухо и ставят в штатив. Температура в помещении пункта должна быть не ниже 18-20°С.
На предметное стекло, лежащее на нагревательном столике микроскопа, имеющем температуру 38-40°С, стеклянной палочкой или пипеткой наносят каплю оттаянной спермы из флакона или ампулы, накрывают покровным стеклом и оценивают. Качество оттаянной спермы определяют под микроскопом по подвижности сперматозоидов. При положительной оценке ее помещают в инструмент для осеменения. Оттаянную сперму необходимо использовать в течение 10-15 мин.
Размораживание спермы в необлицованных гранулах объёмом 0,5-1,0 мл и облицованных объемом 0,25-0,33 мл осуществляют без разбавления цитратом натрия.
Категорически запрещается размораживать гранулы при комнатной температуре или в одном флаконе более одной гранулы, а также оставлять размороженную сперму в водяной бане. Гранулы замороженной спермы должны быть правильной округлой формы без повреждений.