В последнее время широкое распространение получила технология замораживания спермы быков в пайетах – соломинках, с дозой спермы объемом 0,25 мл и 0,5 мл. Распространение пайет связано с появлением западного автоматизированного оборудования по обработке и фасовке семени. На пайете имеется информация о товаре: производитель, дата выработки, имя быка и специальные кодировки. Количество спермиев, их качество, способность оплодотворить яйцеклетку декларируется на уровне западных стандартов.
Для осеменения коров спермой в пайетах используют:
специальные металлические шприцы, оснащенными пластиковыми чехлами, и, что особенно важно, только ректоцервикальным способом.
Подготовка к работе осуществляется обычным способом.
- Техник искусственного осеменения надевает белый халат, колпак или косынку.
- Моет стол и руки.
- Снимает с микроскопа чехол, по необходимости протирает, включает осветитель, предметные и покровные стекла кладет на обогревательный столик микроскопа.
- Готовит термостатированную водяную баню температурой 38 градусов, опускает в неё термометр.
- На чистый стол ставит тампонницу с тампонами, пропитанными 96% спиртом.
- На край стола кладет перчатки, канцелярские скрепки, пипетки, ампулы, салфетки и другие необходимые для осеменения инструменты согласно технологии.
- Пинцетом достает первый спиртовой тампон, обрабатывает пальцы рук от кончиков пальцев к ладони, свободную часть стола и выбрасывает тампон.
- Затем берет второй тампон, обрабатывает подставку для инструментов, протирая сначала среднюю часть, а затем боковые и нижнюю, ставит на стол, тампон выбрасывает.
- Третьим тампоном обрабатывает стеклянную палочку, пинцет, корнцанг, ножницы, инструмент для осеменения.
- Обработанные инструменты кладет на подставку.
Размораживание спермы в пайетах предполагает выполнение последовательности операций.
- Техник надевает защитные очки, перчатки, подтягивает к верхней трети горловины сосуда Дьюара (не более 5 с) канистру с тубой, быстро извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте, пинцетом (корнцангом) соломинку за запаянный конец, встряхивает 2 раза, чтобы удалить остатки азота в текстильной пробке, и быстро погружает в термостат для оттаивания.
- Встряхивание способствует испарению жидкого азота из текстильной пробки и предупреждает возможное выдавливание пробки из соломинки.
- Канистру с семенем опускают в азот. Сосуд закрывает крышкой.
Оттаивать соломинку необходимо в течение 10 с при температуре 38 градусов, перемещая круговыми движениями в воде. Затем соломинку извлекают из термостата, тщательно осушают стерильной марлевой или бумажной салфеткой. Проверяют запись клички, номер быка местонахождение пузырька воздуха (должен находиться с той стороны соломинки, которая запаяна в лаборатории). Поршень шприца оттягивают на 12 см (стержень поршня слегка искривлен, что удерживает его в одном положении). С помощью фильтровальной бумаги или стерильной марлевой салфетки необходимо согреть полость шприца, установить соломинку со стороны текстильной пробки в полость шприца. Конец соломинки со стороны запайки обрезают в середине воздушного пузырька стерильными ножницами строго перпендикулярно. Ножницы должны быть острыми, так как тупые ножницы деформируют соломинку, при этом может нарушиться плотность соединения её с внутренней частью конусного конца защитного чехла. На шприц с соломинкой надевают защитный чехол, который закрепляют. Надежность закрепления проверяют слабым надавливанием большого пальца руки на поршень шприца: чехол не должен сдвигаться. При этом удаляется воздушный пузырек и появляется капелька спермы, которую можно исследовать под микроскопом на подвижностью.
Основным критерием, по которому оценивают качество спермы на пункте искусственного осеменения, является активное прямолинейно-поступательное движение сперматозоидов. При оценке качества необходимо обращать внимание на наличие сперматозоидов с движением по кругу, с колебательными движениями и на агглютинацию сперматозоидов.
Оценку качества спермы проводят при увеличении микроскопа в 120-200 раз. Для качественной оценки необходимо правильно настроить освещение поля зрения микроскопа. Оценку спермы по подвижности проводят при температуре 38-40°С, для чего применяют микроскоп с нагревательным столиком, позволяющим поддерживать необходимую температуру.
